PCR Double Dye Probe 5' FAM + 3' TAMRA 200 nmol scale

Eurogentec es un proveedor de sondas de oligonucleótidos de doble marcaje y ofrece la mayor cantidad de fluoróforo y quenchers. Las sondas de oligonucleótidos de doble marcaje con varios quenchers no fluorescentes y una variedad de fluoróforos se pueden pedir cómodamente mediante nuestra interfaz de pedidos en línea. Además, como muchas aplicaciones, como el genotipado o el perfilado de expresión génica, requieren pequeñas cantidades de varias sondas diferentes, Eurogentec ha desarrollado una plataforma de alto rendimiento para producir sondas de Real-Time qPCR de doble marcaje de alta calidad en pequeña escala.

Sondas de doble marcaje LNA®

Las bases LNA® tienen una modificación en la estructura de la ribosa que bloquea la base en la posición C3’-endo. En comparación con las sondas de doble marcaje de ADN, las sondas de doble marcaje LNA® exhiben mayores estabilidades térmicas, especificidad y reproducibilidad. Muestran una mejor discriminación de desequilibrio, lo que permite el uso de sondas más cortas. Además, LNA® ofrece la posibilidad de ajustar los valores de Tm de los oligo (primer)es y sondas en ensayos multiplex.

Lo que debe saber sobre su sonda de doble marcaje

Todas las sondas de oligonucleótidos de doble marcaje son purificadas por HPLC. Son controladas mediante HPLC analítica y espectrometría de masas MALDI-TOF. Las sondas de oligonucleótidos de doble marcaje se proporcionan liofilizadas en tubos individuales de 2 mL. Las escalas mayores a 2.5 µmol pueden ser entregadas en tubos de 50 mL. La longitud recomendada óptima de las sondas de oligonucleótidos de doble marcaje es de 25 bases. La longitud máxima de las sondas de oligonucleótidos de doble marcaje es de 35 bases. En caso de que se requieran sondas de oligonucleótidos de doble marcaje extra largas, se pueden acoplar internamente quenchers como Black Hole Quencher®, Deep Dark Quencher I y TAMRA.

¿Cómo funcionan las sondas de doble marcaje?

Los oligonucleótidos de doble marcaje tienen un fluoróforo y un quencher en sus extremos 5’ y 3’, respectivamente.

Los oligonucleótidos de doble marcaje están diseñados para hibridar entre los oligo (primer)es de PCR hacia arriba y hacia abajo. El Tm de la sonda de oligonucleótido de doble marcaje debe ser superior al de los oligo (primer)es hacia arriba, para evitar que el oligo (primer) posterior se extienda mientras la sonda de oligonucleótido de doble marcaje aún no se ha hibridado.

Durante el proceso de amplificación, la actividad exonucleasa 5’-> 3’ de la Taq ADN polimerasa corta el fluoróforo de la sonda. Dado que el fluoróforo ya no está sometido al quenching FRET, comienza a fluorescer. Esta fluorescencia se puede medir, y el nivel es directamente proporcional a la cantidad de ADN diana que se acumula durante la reacción de PCR.

FAM

• Absorbancia: 495 nm
• Emisión: 520 nm

TAMRA

• Rango de quenching: [470-560] nm
• Máx: 544 nm