PCR Double Dye Probe 5’DragonflyOrange+3’BHQ-2 5µmol scale

Eurogentec es un proveedor de sondas de oligonucleótidos Double-Dye y ofrece la mayor cantidad de fluoróforo y supresores. Las sondas de oligonucleótidos Double-Dye con varios supresores no fluorescentes y una variedad de fluoróforos se pueden pedir cómodamente a través de nuestra interfaz de pedidos en línea. Además, dado que muchas aplicaciones, como el genotipado o el perfilado de expresión génica, requieren pequeñas cantidades de varias sondas diferentes, Eurogentec ha desarrollado una plataforma de alto rendimiento para producir sondas Double-Dye de alta calidad a pequeña escala para qPCR en tiempo real.

Sondas Double Dye LNA®

Las bases LNA® tienen una modificación que fija la base en la posición C3’-endo. En comparación con las sondas Double-Dye de ADN, las sondas Double-Dye LNA® exhiben una mayor estabilidad térmica, especificidad y reproducibilidad. Muestran una mejor discriminación de emparejamientos erróneos, lo que permite el uso de sondas más cortas. Además, LNA® ofrece la posibilidad de ajustar los valores de Tm de los primers y sondas en ensayos multiplex.

Lo que debes saber sobre tu sonda Double-Dye

Todos los oligonucleótidos Double-Dye son purificados por HPLC. Son controlados mediante HPLC analítico y espectrometría de masas MALDI-TOF. Los oligonucleótidos Double-Dye se proporcionan liofilizados en tubos individuales de 2 mL. Las escalas mayores a 2.5 µmol pueden ser entregadas en tubos de 50 mL. La longitud óptima recomendada para las sondas de oligonucleótidos Double-Dye es de 25 bases. La longitud máxima de los oligonucleótidos Double-Dye es de 35 bases. En caso de que se necesiten sondas Double-Dye extra largas, se pueden acoplar internamente supresores como Black Hole Quencher®, Deep Dark Quencher I y TAMRA.

¿Cómo funcionan las sondas Double-Dye?

Los oligonucleótidos Double-Dye tienen un fluoróforo y un supresor en sus extremos 5’ y 3’, respectivamente.

Los oligonucleótidos Double-Dye están diseñados para unirse entre los primers forward y reverse. El Tm de la sonda de oligonucleótidos Double-Dye debe ser mayor que el del primer ascendente, para evitar que el primer posterior ya esté siendo extendido mientras la sonda Double-Dye aún no se ha unido.

Durante el proceso de amplificación, la actividad exonucleasa 5'-> 3' de la Taq DNA polimerasa corta el fluoróforo de la sonda. Como el fluoróforo ya no está sujeto al apagado por FRET, comienza a fluorescer. Esta fluorescencia puede medirse y el nivel es directamente proporcional a la cantidad de ADN diana que se acumula durante la reacción de PCR.

• Dragonfly Orange™ (DFO) - Absorbancia = 554 nm, Emisión = 576 nm
• BHQ-2™: Rango de supresión [550-650]nm; Máx: 579 nm