Nuevos controles negativos de edición génica
Nuevos controles negativos de edición génica dirigidos a los locus Safe Harbor de Rosa26 de ratón y AAVS1 humano.
Los controles de corte AAVS1/Rosa26 están diseñados para identificar regiones del genoma que no resultan en la inactivación funcional de una proteína ni en cambios fenotípicos conocidos. Estas regiones se conocen como regiones de puerto seguro genómico (GSH), es decir, sitios en el genoma capaces de acomodar la integración de nuevo material genético de una manera que garantiza que los elementos genéticos recién insertados: (i) funcionen de forma predecible y (ii) no provocan alteraciones en el genoma del huésped que supongan un riesgo para la célula.
Los controles de corte AAVS1/Rosa26 están validados para ensayos knockout y se recomiendan para aplicaciones de cribado como control adicional que produce el corte de Cas9 sin una lectura fenotípica.
Los controles no dirigidos se recomiendan como controles negativos para experimentos con crARN en células humanas o murinas. Todos los controles no dirigidos Edit-R están diseñados para presentar un mínimo de tres desajustes o brechas con respecto a todas las posibles dianas adyacentes a PAM en los genomas humanos y murinos. Los cambios en la viabilidad o los niveles de expresión génica en las células tratadas con estos controles probablemente reflejen una respuesta celular basal comparable a los niveles en células tratadas con crARN específicos para la diana.
Estos productos amplían nuestra oferta actual de controles sintéticos y lentivirales Edit-R™ al añadir múltiples especies y opciones de formato para un conjunto completo de controles positivos, neutros y no dirigidos.
Referencias
R. Barrangou, A. Birmingham, et. al. Advances in CRISPR-Cas9 genome engineering: lessons learned from RNA interference. Nucleic Acids Research, 43(7) 3407-3419 (2015)
M.L. Kelley, M.L., Ž. Strezoska, et al. Versatility of chemically synthesized guide RNAs for CRISPR-Cas9 genome editing. J. Biotechnol. 233, 74–83 (2016). doi:10.1016/j.jbiotec.2016.06.011
