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   Gene Editing



Figure 1. Illustration of Cas9 nuclease (1), programmed by the tracrRNA (2) : crRNA (3) complex cutting both strands of genomic DNA 5' of the PAM (4).


El sistema Edit-R CRISPR-Cas9, simplifica  la edición génica permanente. Esta facilidad se debe al uso de secuencias de RNA sintéticos, asociados a la nucleasa Cas9. La combinación perfecta para crear cortes específicos en la secuencia de DNA, permitiendo el silenciamiento génico en genes endógenos. Gracias al diseño de los plásmidos, se evitan pasos de clonaje, consiguiendo la modificación génica en tan solo 3 pasos.

El sistema Dharmacon Edit-R™ CRISPR-Cas9 se basa en el mecanismo de defensa natural de Strerptococcus pyogenes e incluye 3 componentes para realizar la edición génica en células de mamíferos:

Un plásmido de expresión optimizado para la expresión de la nucleasa Cas9

Un RNA sintético de cadena larga, trans-activating CRISPR RNA (tracrRNA)

Un RNA sintético CRISPR RNA (crRNA) diseñado para cortar la secuencia específica en el gen de interés.

Los tres componentes se co-transfectan en las células elegidas usando el DharmaconDharmaFECT™ Duo Transfection Reagent.  Una vez en el interior de las células, el crRNA y el tracrRNA junto con la exonucleasa Cas9 generarán sitios de corte específicos en cadena doble (dsDSBs). Cuando el DNA es cortado, se repara por medio de un mecanismo que genera extremos no homólogos (NHEJ). Este mecanismo generaría pequeñas inserciones y delecciones (indels), lo que da lugar a mutaciones sin sentido, proteinas truncadas o codones de stop, dando lugar a un silenciamiento génico permanente.

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Edit-R CRISPR-Cas9 Gene Engineering Platform
Este video ofrece una visión general de la edición gen CRISPR-Cas9, y detalla cómo el Edit-R ™ CRISPR-gen Cas9 Engineering Platform simplifica el flujo de trabajo con el uso de ARN sintético.

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